Evaluación de primers reportados para detección de KDR en especies de Anopheles colectadas en los departamentos de Caaguazú y Alto Paraná en Paraguay / Evaluation of primers reported for KDR detection in Anopheles species collected in the departments of Caaguazú and Alto Paraná in Paraguay

Las mutaciones KDR en el gen del canal del sodio (VGSC) han sido ya detectadas en al menos 13 especies de mosquitos Anopheles en su mayoría especies de África, pero aún resta por determinar los cebadores específicos para la detección en especies de Latinoamérica. En nuestro país la especie Anopheles darlingi es el vector principal de la malaria, y el A. albitarsis, el vector secundario. Se emplearon muestras de mosquitos Anoheles de las especies A. strodei, A. albitarsis, A. fluminensis, A. evansae, A. nuneztovari, A. nyssorhynchela lutzi y A. oswaldoi capturadas en los departamentos de Caaguazú y Alto Paraná en Paraguay. Para la amplificación y secuenciación se usaron cebadores reportados para el gen VGSC de A. albimanus en Guatemala, que resultaron ser específicos solo para la especie A. strodei. La secuencia revela el codón TTA que codifica para una Leucina como la secuencia TTG, reportada para la versión susceptible en la posición L1014. El fragmento amplificado es de aproximadamente 225 pares de bases. A nuestro entender, esta es la primera caracterización del gen VGSC en mosquitos Anopheles del Paraguay y para la especie A. strodei

KDR mutations in the sodium channel gene (VGSC) have already been detected in at least 13 species of Anopheles mosquitoes, mostly African species, but the molecular techniques for detection in Latin American species have yet to be determined. In our country, Anopheles darlingi species is the main vector of Malaria, and A. albitarsis, the secondary vector. We used samples of Anoheles from the species A. strodei, A. albitarsis, A. fluminensis, A. evansae, A. nuneztovari, A. nyssorhynchela lutzi and A. oswaldoi collected at the departments of Caaguazú and Alto Paraná in Paraguay. For the amplification and sequentiation, primers reported for the VGSC gen of A. strodei in Guatemala were used and were specific only for A. strode in this case. The sequence revealed the TTA codon that codifies for a leucine as the TTG sequence, reported for the susceptible version at position L1014. The amplified fragment is approximately 225 base pairs. To our knowledge, this is the first characterization of the VGSC gene in Anopheles mosquitoes in Paraguay and for the species A. strodei

Post-control surveillance of Triatoma infestans and Triatoma sordida with chemically-baited sticky traps.

BACKGROUND: Chagas disease prevention critically depends on keeping houses free of triatomine vectors. Insecticide spraying is very effective, but re-infestation of treated dwellings is commonplace. Early detection-elimination of re-infestation foci is key to long-term control; however, all available vector-detection methods have low sensitivity. Chemically-baited traps are widely used in vector and pest control-surveillance systems; here, we test this approach for Triatoma spp. detection under field conditions in the Gran Chaco. METHODOLOGY/PRINCIPAL FINDINGS: Using a repeated-sampling approach and logistic models that explicitly take detection failures into account, we simultaneously estimate vector occurrence and detection probabilities. We then model detection probabilities (conditioned on vector occurrence) as a function of trapping system to measure the effect of chemical baits. We find a positive effect of baits after three (odds ratio [OR] 5.10; 95% confidence interval [CI(95)] 2.59-10.04) and six months (OR 2.20, CI(95) 1.04-4.65). Detection probabilities are estimated at p ≈ 0.40-0.50 for baited and at just p ≈ 0.15 for control traps. Bait effect is very strong on T. infestans (three-month assessment: OR 12.30, CI(95) 4.44-34.10; p ≈ 0.64), whereas T. sordida is captured with similar frequency in baited and unbaited traps. CONCLUSIONS/SIGNIFICANCE: Chemically-baited traps hold promise for T. infestans surveillance; the sensitivity of the system at detecting small re-infestation foci rises from 12.5% to 63.6% when traps are baited with semiochemicals. Accounting for imperfect detection, infestation is estimated at 26% (CI(95) 16-40) after three and 20% (CI(95) 11-34) after six months. In the same assessments, traps detected infestation in 14% and 8.5% of dwellings, whereas timed manual searches (the standard approach) did so in just 1.4% of dwellings only in the first survey. Since infestation rates are the main indicator used for decision-making in control programs, the approach we present may help improve T. infestans surveillance and control program management.

Origins of Chagas disease: Didelphis species are natural hosts of Trypanosoma cruzi I and armadillos hosts of Trypanosoma cruzi II, including hybrids.

Trypanosoma cruzi, the causative agent of Chagas disease, has at least two principal intraspecific subdivisions, T. cruzi I (TCI) and T. cruzi II (TCII), the latter containing up to five subgroups (a-e). Whilst it is known that TCI predominates from the Amazon basin northwards and TCII to the South, where the disease is considered to be clinically more severe, the precise clinical and evolutionary significance of these divisions remains enigmatic. Here, we present compelling evidence of an association between TCI and opossums (Didelphis), and TCII and armadillos, on the basis of key new findings from the Paraguayan Chaco region, together with a comprehensive analysis of historical data. We suggest that the distinct arboreal and terrestrial ecologies, respectively, of these mammal hosts provide a persuasive explanation for the extant T. cruzi intraspecific diversity in South America, and for separate origins of Chagas disease in northern South America and in the southern cone countries.

Producciòn local de Leishmanina / Local Leishmanin production / Annual reports 1996

La prueba cutànea de la leishmanina (reacciòn de Montenegro) es ùtil como mètodo de tamizaje para el diagnòstico epidemiològico de las leishmaniasis, permitiendo definir las zonas endèmicas para la enfermedad. Sòlo con una buena confiabilidad en los antìgenos se asegura que la prueba cutànea responda a las expectativas en estudios epidemiològicos. En el IICS se han producido hasta el momento seis lotes de dicho antìgeno a partir de promastigotes de L. amazonensis, que han aprobado los diversos ensayos de control, segùn dictados internacionales para productos de administraciòn parenteral. De todos los ensayos realizados, sòlo el ensayo de acividad, desarrollado a nivel experimental en animales, no arroja aùn resultados concluyentes. La disponibilidad de esta producciòn en el IICS permitirà desarrollar estudios epidemiològicos acerca de la prevalenciaq de la leishmaniasis en el Paraguay.

Producciòn local de Leishmanina / Local Leishmanin production / Annual reports 1996

La prueba cutànea de la leishmanina (reacciòn de Montenegro) es ùtil como mètodo de tamizaje para el diagnòstico epidemiològico de las leishmaniasis, permitiendo definir las zonas endèmicas para la enfermedad. Sòlo con una buena confiabilidad en los antìgenos se asegura que la prueba cutànea responda a las expectativas en estudios epidemiològicos. En el IICS se han producido hasta el momento seis lotes de dicho antìgeno a partir de promastigotes de L. amazonensis, que han aprobado los diversos ensayos de control, segùn dictados internacionales para productos de administraciòn parenteral. De todos los ensayos realizados, sòlo el ensayo de acividad, desarrollado a nivel experimental en animales, no arroja aùn resultados concluyentes. La disponibilidad de esta producciòn en el IICS permitirà desarrollar estudios epidemiològicos acerca de la prevalenciaq de la leishmaniasis en el Paraguay

Tratamiento con benznidazol en niños de seis a doce años infectados con T. cruzi / Annual reports 1995 / Treatment with benznidazole in six-twelve aged children infected with T. cruzi

Este estudio se realizò en el marco del Programa Nacional de Control de la Enfermedad de Chagas se desarrollò a fin de evaluar el èxito terapèutico del benznidazol en niños de 6 a 12 años de edad infectados con T. cruzi y establecer las mejores tècnicas para determinar la cura parasitològica y serològica de las personas tratadas. Para ello, 20 niños en edad escolar procedentes de dos compañias del Departamento de Paraguarì (àrea endèmica para la enfermedad de Chagas), cuya infecciòn con T. cruzi fue determinada mediante un tamizaje serològico (ELISA), fueron tratados con benznidazol (5-7mg/kg de peso por 60 dìas). Antes del inicio del tratamiento, los niños fueron sometidos a un examen clìnico de control, hemocultivo, xenodiagnòstico, parasitemia directa, reacciòn en cadena de la polimerasa (PCR) y confirmaciòn serològica (ELISA, IFI). Ademàs, se realizaron determinaciones basales y a los 20 dìas del tratamiento de hemograma, GOT, bilirrubina total, directa e indirecta para controlar la apariciòn de efectos colaterales del tratamiento. No se observaron variaciones entre las determinaciones hematològicas y quìmicas basales y las realizadas a los 20 dìas. En el estudio basal, el 15 por ciento (3/20) de las muestras tuvo parasitemia directa positiva, el 5 por ciento (1/20) tuvo hemocultivo positivo, el 55 por ciento (11/20) de los xenodiagnòsticos fue positivo y el 85 por ciento (17/20) tuvo PCR positivo. En cuanto a la serologìa, el 100 por ciento de las muestras fueron positivas tanto por ELISA como por IFI. A los seis meses de finalizado el tratamiento, se realizò la primera evaluaciòn serològica y parasitològica detectàndose en el 100 por ciento de las muestras parasitemia negativa. La serologìa para T. cruzi siguiò siendo positiva en todos los casos por ambos mètodos (ELISA e IFI) pero se observò una disminuciòn de los tìtulos que fue estadìsticamente significativa tanto por ELISA (p<0,0001) como por IFI (p<0,05). A los seis meses del tratamiento, si bien todas las muestras fueron negativas por todos los mètodos parasitològicos incluyendo al PCR, tècnica altamente sensible en la fase crònica de la enfermedad de Chagas y al xenodiagnòstico, no se puede hablar aùn de cura en forma concluyente debido a la positividad de los mètodos serològicos que puede indicar presencia del paràsito o una memoria inmunològica remanente. Sin embargo, se debe resaltar la disminuciòn, estadìsticamente significativa, de los tìtulos serològicos por los dos mètodos utilizados

Tratameinto con benznidazol en niños de seis a doce años infectados con T. cruzi / Annual reports 1995 / Treatment with benznidazole in six-twelve aged children infected with T. cruzi

Este estudio se realizò en el marco del Programa Nacional de Control de la Enfermedad de Chagas se desarrollò a fin de evaluar el èxito terapèutico del benznidazol en niños de 6 a 12 años de edad infectados con T. cruzi y establecer las mejores tècnicas para determinar la cura parasitològica y serològica de las personas tratadas. Para ello, 20 niños en edad escolar procedentes de dos compañias del Departamento de Paraguarì (àrea endèmica para la enfermedad de Chagas), cuya infecciòn con T. cruzi fue determinada mediante un tamizaje serològico (ELISA), fueron tratados con benznidazol (5-7mg/kg de peso por 60 dìas). Antes del inicio del tratamiento, los niños fueron sometidos a un examen clìnico de control, hemocultivo, xenodiagnòstico, parasitemia directa, reacciòn en cadena de la polimerasa (PCR) y confirmaciòn serològica (ELISA, IFI). Ademàs, se realizaron determinaciones basales y a los 20 dìas del tratamiento de hemograma, GOT, bilirrubina total, directa e indirecta para controlar la apariciòn de efectos colaterales del tratamiento. No se observaron variaciones entre las determinaciones hematològicas y quìmicas basales y las realizadas a los 20 dìas. En el estudio basal, el 15 por ciento (3/20) de las muestras tuvo parasitemia directa positiva, el 5 por ciento (1/20) tuvo hemocultivo positivo, el 55 por ciento (11/20) de los xenodiagnòsticos fue positivo y el 85 por ciento (17/20) tuvo PCR positivo. En cuanto a la serologìa, el 100 por ciento de las muestras fueron positivas tanto por ELISA como por IFI. A los seis meses de finalizado el tratamiento, se realizò la primera evaluaciòn serològica y parasitològica detectàndose en el 100 por ciento de las muestras parasitemia negativa. La serologìa para T. cruzi siguiò siendo positiva en todos los casos por ambos mètodos (ELISA e IFI) pero se observò una disminuciòn de los tìtulos que fue estadìsticamente significativa tanto por ELISA (p<0,0001) como por IFI (p<0,05). A los seis meses del tratamiento, si bien todas las muestras fueron negativas por todos los mètodos parasitològicos incluyendo al PCR, tècnica altamente sensible en la fase crònica de la enfermedad de Chagas y al xenodiagnòstico, no se puede hablar aùn de cura en forma concluyente debido a la positividad de los mètodos serològicos que puede indicar presencia del paràsito o una memoria inmunològica remanente. Sin embargo, se debe resaltar la disminuciòn, estadìsticamente significativa, de los tìtulos serològicos por los dos mètodos utilizados

Acción tripanocida y toxicidad de alcaloides bisbenzylisouinqlicos y de un derivado fenolico (FC.108), en ensayos in vivo en ratones c3h infectados con T.cruzi experimentalmente / Annual reports 1994

Un total de sesenta ratones C3H infectados con la cepa epsilon, fueron tratados con alcaloides bisbenzylisoquinolicos (50 ratones) y un derivado fenólico (Fc.108), (10 ratones) con el propósito de determinar la actividad tripanocida in vivo contra el T.cruzi de estas sustancias. También se evaluaron otros efectos como: (actividad protectiva y/o toxicidad) al comparar las lesiones del miocardio por medio de estudios histopatológicos en los ratones tratados y no tratados con estos alcaloides. Se encontraron lesiones histopatogicas en todos los ratones tratados y no tratados pero sólo en estos últimos (grupos controles), se hallaron daños mas severos y nidos de amastigotes de T. cruzi en el miocardio. Se encontraron marcadas diferencias entre el grupo control y el grupo de ratones tratados con cycleanine y curine. Todos los ratones tratados presentaron menor parasitemia y una mayor sobrevida

Caracterización de cepas Paraguayas de Trypanosoma Cruzi aislada de pacientes agudos de la enfermedad de Chagas / Characterization of paraguayan Trypanosoma Cruzi strains isolated from acute patients of Chagas disease / Annual Reports 1992

Six Trypanosoma Cruzi Paraguayan strains, isolated from accute chagasic patients, were studied by their behaviour in Bald/C mice, metacylogenesis, biometry of metaciclic froms and lectin agglutination. Early, intermediate and late parasitemic peaks were observed and the strains did not show high virulence. Metacyclogenesis capacity was not higher than 50 percent in all cases, and there were no big differences inthe biometry and lectin agglutination assays. Although previous schizodeme analysis of these strains showed rather homogeneous profiles, biological feautures were quite heterogeneous